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619 人阅读发布时间:2025-06-11 11:29
ABTS(2,2'-azinobis(3-ethylbenzothiazoline-6-sulfonic acid))清除能力试剂盒是一种常用的体外抗氧化能力检测方法,主要通过测定样品对ABTS自由基的清除能力,评估其抗氧化活性。实验中获得的清除率和Trolox当量结果具有一定的代表性,但在操作过程中需要注意以下事项,以确保结果的准确性和重复性:
一. 实验注意事项
1. 试剂的准备与保存
ABTS溶液:应新鲜配制或按说明书要求存放,避免光照和高温,防止降解。
氧化剂:应新配或新鲜准备,确保反应的有效性。
Trolox标准品 :应准确配制,避免浓度偏差,存放于避光、低温条件下。
样品溶液 :应按要求稀释,避免浓度过高或过低影响测定。
2. 反应体系的控制
反应时间 :ABTS+自由基的生成和反应时间应严格控制,一般在6-12分钟,保持一致,避免时间误差影响结果。
温度控制:反应在室温下进行,避免温度波动对反应速率的影响。
光照条件 :反应过程中避免强光照射,防止光敏反应影响。
3. 样品加入量的标准化
样品体积和浓度应一致,避免因加入量不同导致的误差。
若样品浓度较高,建议进行稀释,确保反应在线性范围内。
4. 空白和对照组的设置
空白组 :不含样品的反应体系,用于校正背景吸光度。
标准曲线 :用已知浓度的Trolox绘制标准曲线,确保线性关系良好。
5. 吸光度测定
使用酶标仪或分光光度计,波长一般在734 nm左右(具体根据试剂盒说明)。
读数应在稳定后立即记录,避免延迟。
6. 数据计算
计算清除率(%)和Trolox当量时,应严格按照试剂盒说明进行,确保标准曲线的拟合良好。
多次重复测定,取平均值以提高数据可靠性。
7. 注意避免交叉污染
使用干净的吸头和试管,避免样品交叉污染。
8. 实验记录与质量控制
详细记录每次操作条件(时间、温度、样品浓度等)。
定期校准仪器,确保读数准确。
二. 其他建议
在操作前充分熟悉试剂盒说明书,严格按照步骤操作。
在不同批次之间进行验证,确保结果的可比性。
对于不熟悉的操作,建议进行预实验以优化条件。
通过严格控制操作条件,可以获得准确、可靠的ABTS清除能力(包括清除率和Trolox当量)结果,为抗氧化活性评价提供科学依据。