病理实验-HE染色操作

在病理实验中，石蜡切片最常用的染色之一就是HE染色法 ，它主要是观察细胞内部的形态结构。苏mu精染液为碱性 ，主要使细胞核内的染色质与胞质内的核酸着紫蓝色 ；伊红为酸性染料 ，通过这个实验可以显示各种组织或者细胞成分与病变的一般形态结构特点 。像炎症因子类的，一般选择HE染色，观察阳性细胞。

下面简单介绍HE染色需要的试剂，耗材之类和操作经过如下：固定液：常用95%乙醇和冰丙酮。苏mu精染液：称取苏mu精粉0.5g，铵矾24g溶解于70ml蒸馏水中，然后取NaIO 31g，水5ml，再加入甘油30ml和冰cu酸2ml，混合均匀，滤纸过滤，备用。伊红染液：称取0.5g水溶性伊红染液，溶于100ml蒸馏水中。稀盐酸乙醇溶液：用75%乙醇配制1%盐酸。系列浓度的乙醇、二jia苯、中性树胶。培养瓶、培养皿、眼科镊、盖玻片、载玻片、显微镜。

前期准备好之后，开始操作：

首先将石蜡切片脱蜡至水，依次将切片放入二jia苯Ⅰ10min-二jia苯Ⅱ10min-无水乙醇Ⅰ5min-无水乙醇Ⅱ5min-95%酒精5min-90%酒精5min-80%酒精5min-70%酒精5min-蒸馏水洗。然后将切片入Harris苏木素染3-8min，自来水洗，1%的盐酸酒精分化数秒，自来水冲洗，0.6%an水返蓝，流水冲洗。接着切片入伊红染液中染色1-3min后。最后切片依次放入95%酒精I 5min -95%酒精II 5min-无水乙醇Ⅰ5min -无水乙醇Ⅱ5min -二jia苯Ⅰ5min -二jia苯Ⅱ5min中脱水透明，将切片从二jia苯拿出来稍晾干，中性树胶封片，实验结束。然后用显微镜镜检，图像采集分析。

在实验中需要注意事项：

切片脱水透明 切片经HE染色后，要彻底脱水透明，才能用中性树胶封盖。如果脱水不彻底，封片后呈白色雾状，镜下观察模糊不清，且容易褪色。切片1-2级无水乙醇脱水，也可使用石tan酸二jia苯进行脱水。石tan酸有较强脱水能力，但长时间可使切片脱色，因此要经过多次二jia苯以使石碳酸完全除去。

如何看HE染色结果呢？

细胞核被苏mu精染成鲜明的蓝色，软骨基质、钙盐颗粒呈深蓝色，粘液呈灰蓝色。细胞浆被伊红染成深浅不同的粉红色至桃红色，胞浆内嗜酸性颗粒呈反光强的鲜红色。胶原纤维呈淡粉红色，弹力纤维呈亮粉红色，红血球呈橘红色，蛋白性液体呈粉红色。着色情况与组织或细胞的种类有关，也随其生活周期及病理变化而改变。例如，细胞在新生时期胞浆对伊红着色较淡或轻度嗜碱，当其衰老时或发生退行性变则呈现嗜伊红浓染。胶原纤维在老化和出现透明变性时，伊红着色由浅变深。那H-E染色评定标准是如何判定呢：首先看切片完整，厚度4-6微米，厚薄均匀，无皱褶无刀痕；然后是染色核浆分明，红蓝适度，透明洁净，封裱美观。