超氧化物歧化酶(SOD)试剂盒-WST-8法实验注意事项

     超氧化物歧化酶（SOD）试剂盒的WST-8法是一种用于测定样品中SOD活性的常用方法。WST-8是一种水溶性四唑盐，在酶的催化作用下可以被还原为一种可溶性的橙色产物（formazan），其吸光度与SOD活性成正比。

1. 材料准备

(1):试剂
     SOD标准品
      WST-8试剂
      PBS缓冲液（pH 7.4）
      过氧化氢（H2O2）
      样品（如细胞裂解液、组织匀浆等）

(2):仪器：
     微量移液器
     光度计或酶标仪（波长通常设置在450 nm）
     试管或96孔板

2. 实验步骤

（1）. 样品准备：
   - 收集样品（如细胞或组织），并在适当的缓冲液中进行匀浆或裂解，离心去除细胞 debris，取上清液作为待测样品。

（2）. 反应体系配置：
      在96孔板中或试管中，加入以下成分：
     a: 适量的PBS缓冲液
     b:WST-8试剂（根据说明书推荐浓度）
     c: 适量的H2O2（通常为固定浓度）
     d:样品（待测液）和标准SOD溶液（作为对照）
     e:每组实验设置空白对照（不加样品和标准SOD）。

（3）. 反应孵育：
          在37°C下孵育反应体系，通常为30分钟到1小时，具体时间可根据试剂盒说明书调整。

（4）. 终止反应：
         通过加入终止液（如1 M HCl）来终止反应，具体根据试剂盒说明书。

（5）. 测定吸光度：
         使用光度计或酶标仪测定各孔的吸光度，波长设置为450 nm。

3. 数据分析

     根据标准曲线（以已知浓度的SOD标准品为基础）计算样品中SOD的活性。通过比较样品与空白对照的吸光度变化，得出SOD活性。

4：注意事项

（1） 确保所有试剂和设备的清洁，避免交叉污染。
（2） 实验过程中保持恒温，避免温度波动对结果的影响。
（3） 记录每一步的操作和数据，以便后续分析和复现实验。

5:试剂盒

    每一个厂家生产的试剂盒标准有差异，请严格按照试剂盒里配套说明书操作！