人抗组织转谷氨酰胺酶IgA抗体（tTG-IgA）试剂盒

人抗组织转谷氨酰胺酶IgA抗体（tTG-IgA）试剂盒（ELISA）

使用说明书

 

 

 

l 本试剂盒用于体外定量检测血清、血浆、组织匀浆及相关液体样本中人抗组织转谷氨酰胺酶IgA抗体（tTG-IgA）的含量。

l 有效期：6个月

l 保存条件：2-8℃

l 本试剂盒仅供科研使用，不得用于临床诊断

 

 

实验原理

试剂盒采用间接法酶联免疫吸附试验（ELISA）。往预先包被人抗组织转谷氨酰胺酶IgA抗体（tTG-IgA）捕获抗原的包被微孔中，依次加入标本、标准品、HRP标记的检测抗体，经过温育并彻底洗涤。用底物TMB显色，TMB在过氧化物酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。颜色的深浅和样品中的人抗组织转谷氨酰胺酶IgA抗体（tTG-IgA）呈正相关。用酶标仪在450nm 波长下测定吸光度（OD 值），计算样品浓度。

 

样本处理及要求

1.  血清：将收集于血清分离管的全血标本在室温放置2小时或4℃过夜，然后1000×g离心20 分钟，取上清即可，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
2.  血浆：用EDTA或肝素作为抗凝剂采集标本，并将标本在采集后的30分钟内于2-8℃ 1000×g离心15分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。
3.  组织匀浆：用预冷的PBS (0.01M, pH=7.4)冲洗组织，去除残留血液（匀浆中裂解的红细胞会影响测量结果），称重后将组织剪碎。将剪碎的组织与对应体积的PBS（一般按1:9的重量体积比，比如1g的组织样品对应9mL的PBS，具体体积可根据实验需要适当调整，并做好记录。推荐在PBS中加入蛋白酶抑制剂）加入玻璃匀浆器中，于冰上充分研磨。为了进一步裂解组织细胞，可以对匀浆液进行超声破碎，或反复冻融。最后将匀浆液于5000×g离心5~10分钟，取上清检测。

4.  细胞培养物上清或其它生物标本：请1000×g离心20分钟，取上清即可检测，或将上清置于-20℃或-80℃保存，但应避免反复冻融。

注：标本溶血会影响最后检测结果，因此溶血标本不宜进行此项检测。