小鼠皮质酮;肾上腺酮（CORT）定量检测试剂盒

实验原理

本试剂盒采用竞争法酶联免疫吸附试验（ELISA）。在预包被抗小鼠皮质酮;肾上腺酮（CORT）抗体（固相抗体）的微孔酶标板中，加入小鼠皮质酮;肾上腺酮（CORT）校准品和待测样本，再加入HRP标记的小鼠皮质酮;肾上腺酮（CORT）抗原（酶标抗原），经过温育与充分洗涤，去除未结合的组分，在微孔板固相表面形成固相抗体-酶标抗原的免疫复合物。加底物A和B，底物在HRP催化下，产生蓝色产物，在终止液（2M 硫酸）作用下，最终转化为黄色，在酶标仪450nm波长上测定吸光度（OD值），吸光度（OD值）与待测样品中小鼠皮质酮;肾上腺酮（CORT）的浓度负相关。拟合校准品曲线，可以计算出样本中小鼠皮质酮;肾上腺酮（CORT）的浓度。

操作程序

所有试剂和组分都先恢复到室温，标准品、质控品和样品，建议做复孔。

1、 按前面说明书描述的方法，配制好试剂盒各种组分的工作液。

2、 从铝箔袋中取出所需板条，剩余的板条用自封袋密封放回冰箱。

设置标准品孔、空白孔和样本孔，标准品孔各加不同浓度的标准品50μL，空白孔不加，样本孔加待测样本50μL。

3、除空白孔外，标准品孔和样本孔，加入辣根过氧化物酶（HRP）标记的检测抗原100μL。

1、 用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育60min。

2、 揭开封板膜，弃去液体，吸水纸上拍干，每孔加满洗涤液，静置20S，甩去洗涤液，吸水纸上拍干，如此重复5次。若使用自动洗板机，请按洗板机操作程序进行洗板，添加浸泡30s的程序，可以提高检测的精度。洗板结束，加底物前，要在干净不掉屑的纸上，充分拍干反应板。

3、 将底物A和B按1:1体积充分混合，所有孔中加入底物混合液100μL。用封板膜盖住反应板，37℃水浴锅或恒温箱温育15min。

4、 所有孔加入终止液50μL，在酶标仪上读取各孔吸光度（OD值）。

1、 检测范围

7.5 ng/mL - 240 ng/mL